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你知道ATCC細(xì)胞如何解凍嗎?

原載自:www.008580.com[技術(shù)資料頻道]  2022-03-02  瀏覽次數(shù):1220

   ATCC細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)通過在支持物(如蓋玻片)上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞,可以應(yīng)用抗體檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。該方法的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞貼壁牢固,能夠維持細(xì)胞生長時(shí)的狀態(tài)。
  ATCC細(xì)胞的冷凍保存方法:
  傳統(tǒng)方法是冷存管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16-18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時(shí),以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
  程序降溫則利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞之保存。
  那么ATCC細(xì)胞又如何解凍呢?
  1.冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結(jié)晶而對細(xì)胞造成傷害,導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。
  2.細(xì)胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常。
  3.材料:37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器。
  4.主要步驟:
  ①操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害;
  ②自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時(shí)蓋子易松掉;
  ③將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi);
  ④取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內(nèi);
  ⑤取出解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10-1:15),混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細(xì)胞懸浮液作存活測試;
  ⑥解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑(如DMSO),依細(xì)胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除,則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心1000rpm,5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);
  ⑦若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

 

 

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